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內(nèi)參也叫看家基因,在組織或細胞中都會表達,且表達量在不同組織或細胞中幾乎是相同的,一般有α-Tublin ,β-actin GAPDH 等,在Western Blotting 中使用內(nèi)參其實就是在WB 過程中的另外用內(nèi)參對應的抗體檢測內(nèi)參。其作用有二:

1.是看提取蛋白質(zhì)量的好壞。如果做western 的時候,內(nèi)參照蛋白有條帶,而目的蛋白沒有,說明蛋白的提取和轉(zhuǎn)膜等步驟沒有問題,是目的蛋白的抗體質(zhì)量不好或者是稀釋倍數(shù)不對。

2.是比較客觀的說明目的蛋白的表達情況,消除上樣量等的誤差。不同的樣品之間由于蛋白提取的量有差別,可能強陽性的表達跑出來的帶很弱。因此設立內(nèi)參照,比較不同樣品之間的表達情況。

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