DAPI，也稱DAPI dihydrochloride，是一種常用的核酸染料，可以和雙鏈DNA富含AT序列的小溝結(jié)合，產(chǎn)生比自身強(qiáng)20多倍的藍(lán)色熒光。
和EB(ethidium bromide)相比，DAPI對(duì)雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。DAPI也可對(duì)RNA進(jìn)行染色，染色機(jī)理是其可以選擇性嵌入“AU序列”并發(fā)出熒光。相比DAPI-dsDNA
(Ex/Em=358nm/461 nm)，
DAPI-RNA具有較長(zhǎng)的最大發(fā)射波長(zhǎng)(500 nm)，其熒光亮度僅有DAPI-dsDNA的20%。
盡管DAPI不能通過活細(xì)胞膜，但可以通過提高濃度使之進(jìn)入活細(xì)胞。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用來檢測(cè)酵母線粒體DNA，葉綠體DNA，病毒DNA，Microplasm DNA以及
染色體DNA。
DAPI典型的藍(lán)色熒光特性使其非常普遍的搭配其他綠色、黃色或紅色熒光染料用于細(xì)胞生物學(xué)多色熒光標(biāo)記技術(shù)，因此也常作為核酸和染色體的復(fù)染劑用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)、RNA原位雜 交、直接或間接免疫檢測(cè)等領(lǐng)域，其染色后可用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
使用方法:
1. 配制工作液：
用雙蒸水或PBS稀釋母液，配制成所需要的工作的濃度（0.5-10 μg/mL）。
2. 固定的細(xì)胞或組織染色：
對(duì)于固定的細(xì)胞或組織樣品，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑。DAPI染色通常在其他染色的最后進(jìn)行。如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行DAPI 染色。
a) 對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片：加入適量DAPI染色液，覆蓋住樣品即可。
b) 對(duì)于懸浮細(xì)胞：至少加入待測(cè)染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5分鐘。
c) 吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。
d) 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長(zhǎng)360 nm，發(fā)射波長(zhǎng)460 nm。
3. 活細(xì)胞或組織染色：
a) 細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量DAPI染色液，約1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積，必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對(duì)于六孔板一個(gè)孔需加入1 mL染色液，對(duì)于96孔板一個(gè)孔需加入100 μL染色液。
b) 在37℃培養(yǎng)細(xì)胞 10～20 分鐘。
c) 用 PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。
d) 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長(zhǎng)360 nm，發(fā)射波長(zhǎng)460 nm。
DAPI，熒光顏色：藍(lán)色；染細(xì)胞類型：活細(xì)胞和固定細(xì)胞；應(yīng)用：
（1）DAPI是一種常用的可以穿透細(xì)胞膜藍(lán)色熒光DNA染料，可對(duì)DNA 染色的細(xì)胞核染色試劑，其與DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比DAPI 自身強(qiáng)20多倍的熒光，而與單鏈DNA結(jié)合無熒光的增強(qiáng)。
（2）DAPI常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。DAPI對(duì)雙鏈DNA的染色靈敏度要高于EB和PI,熒光強(qiáng)度比Hoechst低，但光穩(wěn)定性高于Hoechst。
（3）DAPI能快速進(jìn)入活細(xì)胞中與DNA結(jié)合，因此DAPI對(duì)生物體而言，也被視為-種毒性物質(zhì)與致癌物。使用過程中應(yīng)注意操作與拋棄的處理程序。
使用PI單一染色觀測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞，只能表示細(xì)胞的壞死情況，而不是凋亡（當(dāng)然晚期凋亡PI亦可著色）。
但是如果我們只是想知道細(xì)胞的死亡情況，而不是仔細(xì)區(qū)分壞死或凋亡，那么PI單一染色即可以。但是如果我們一定要認(rèn)定細(xì)胞的凋亡，那么PI單一染色顯然不夠！
這個(gè)時(shí)候使用Abbkine的細(xì)胞狀態(tài)檢測(cè)系列產(chǎn)品，例如，TUNEL法細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（細(xì)胞凋亡晚期），Annexin V/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒和線粒體膜電位分析試劑盒（JC-1）
（細(xì)胞凋亡早期）以及Caspase系列活性分析試劑盒(比色法)（細(xì)胞凋亡中期）。
魯公網(wǎng)安備 37021202000795號(hào)