ONPG是β-半乳糖苷酶的底物，形成鄰硝基苯酚。鄰硝基苯酚在堿性溶液中為黃色，可以在410-420 nm 波長處測定含量。
在pH 10.2的條件下，摩爾消光系數(shù)為 2.13×104。我們已經用該產品作為底物在410nm測定處的吸光率
檢測β-半乳糖苷酶的活性。
在 Tris緩沖液 ，pH 7.6, 20℃的條件下，β-半乳糖苷酶 (從大腸桿菌中獲得)的 Km 值為 9.5×10-4 M ，
在該底物條件下的最大反應速率為134 µmoles/min/mg 酶.該產品可以在水溶液中配制成3 mg/ml的濃度，
儲液也可以在磷酸緩沖液中配制。
當用作β-半乳糖苷酶的底物時，可在100 mM 鈉磷酸鹽緩沖液，pH 7.3，配制成濃度約為20.5 mg/ml的溶液，
可以輕微加熱使其完全溶解。
用于檢測β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)活性，是β-半乳糖苷酶的顯色底物。
經β-半乳糖苷酶催化后可產生黃色產物，在410－420nm波長可以檢測吸光度。
利用b-galactosidase活性與否可以來決定微生物是否可以發(fā)酵乳糖，
而b-galactosidase的活性則可利用o-nitrophynyl, b-D-galactopyranoside(ONPG)來測定，
如果有b-galactosidase存在的微生物則會使無色ONPG水解成黃色的o-nitrophynyl(ONP)，
因此水溶液會變成黃色。
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