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2X 探針法qPCR Mix （TaqMan熒光定量PCR試劑盒）是基于熒光探針檢測的即用型 PCR 試劑盒，可以對靶片段進(jìn)行實(shí)時(shí)定量 PCR 分析（quantitative PCR、qPCR）。

產(chǎn)品含有經(jīng)過優(yōu)化的緩沖液組分、熱啟動(dòng) Taq DNA 聚合酶、Taq DNA 穩(wěn)定劑、dNTPs、MgCl2和穩(wěn)定劑等所有實(shí)時(shí)定量 PCR 所需要的成分

熒光定量PCR（qPCR）是大家常用的分子生物學(xué)技術(shù)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)方法的不同

qPCR可以分為染料法（SYBR Green法為代表）和探針法（Taqman法為代表）

因?yàn)椴僮骱唵?，價(jià)格便宜，SYBR Green法qPCR 受到了更為普遍的使用。

但是SYBR Green法并非萬能的，在很多時(shí)候SYBR Green無法滿足實(shí)驗(yàn)的需要

Taqman qPCR特異性強(qiáng)，信噪比高，能夠適用于多重qPCR，數(shù)據(jù)更具說服力

Taqman法qPCR的原理:

Taqman是一段短的單鏈DNA探針，能夠和模板DNA進(jìn)行退火。Taqman探針的5’端帶有一個(gè)報(bào)告基團(tuán)（R），3’端帶有一個(gè)猝滅基團(tuán)（Q）。報(bào)告基團(tuán)所發(fā)出的熒光會(huì)被猝滅基團(tuán)所吸收，因此正常情況下熒光探針是不會(huì)發(fā)出熒光的。在PCR的延伸過程中，DNA聚合酶沿著模板鏈從5’到3’的方向合成新鏈，當(dāng)DNA聚合酶到達(dá)Taqman探針結(jié)合位點(diǎn)時(shí)，DNA聚合酶的5’-3’外切酶活性會(huì)將Taqman探針進(jìn)行水解，導(dǎo)致Taqman探針的報(bào)告基團(tuán)脫離了猝滅基團(tuán)，從而發(fā)出熒光。可以根據(jù)熒光值的高低，判斷PCR過程中目的片段產(chǎn)生的多少，從而實(shí)現(xiàn)對目的基因進(jìn)行實(shí)時(shí)定量。

在Taqman qPCR中，上下游引物只有擴(kuò)增探針?biāo)Y(jié)合的片段時(shí)，才會(huì)產(chǎn)生熒光，非特異擴(kuò)增是不會(huì)產(chǎn)生熒光的，因此Taqman qPCR的特異性非常好。另外，可以用不同的報(bào)告基團(tuán)，標(biāo)記多個(gè)熒光探針，實(shí)現(xiàn)在一管PCR體系中，同時(shí)對多個(gè)基因進(jìn)行定量，這樣不僅實(shí)驗(yàn)的通量大大提高，而且實(shí)驗(yàn)的一致性也更好。

什么時(shí)候需要使用探針法qPCR:

相對于SYBR Green qPCR，探針法qPCR需要設(shè)計(jì)和合成特異的熒光探針，增加了設(shè)計(jì)難度和實(shí)驗(yàn)成本。但是，當(dāng)你遇到如下情況時(shí)，Taqman qPCR是你的第一選擇。

>>>1.基因檢測

以Taqman為代表的探針法qPCR最常用的應(yīng)用場景就是基因檢測，包括醫(yī)療診斷，環(huán)境微生物檢測，轉(zhuǎn)基因檢測等。這些應(yīng)用場景對結(jié)果的特異性要求非常高，而染料法qPCR的結(jié)果很容易受到非特異性擴(kuò)增的干擾，因此一般都是使用Taqman qPCR進(jìn)行檢測。

>>>>2.很難設(shè)計(jì)特異性引物

qPCR對引物的擴(kuò)增效率要求很高，如果用相對定量法（Livak法）進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，需要保證引物的擴(kuò)增效率在90%到105%之間，否則最后得到的數(shù)據(jù)不真實(shí)。然而有時(shí)候，為了保證擴(kuò)增的特異性，只能在某個(gè)特異位點(diǎn)設(shè)計(jì)引物，從而犧牲了一些其它的引物設(shè)計(jì)原則，比如GC含量過高，引物有二級結(jié)構(gòu)等，導(dǎo)致qPCR擴(kuò)增的效率過低。這種情況下用Taqman qPCR可以很好的解決這一點(diǎn)，因?yàn)門aqman 探針本身就可以保證特異性，因此設(shè)計(jì)引物的時(shí)候有更多靈活性，更容易設(shè)計(jì)擴(kuò)增效率高的引物對。

>>>>3.發(fā)表高水平文章

由于Taqman法比SYBR Green法具有更好的特異性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果更接近真實(shí)，所以很多高水平文章更青睞于Taqman qPCR的結(jié)果。特別是一些關(guān)鍵基因的關(guān)鍵結(jié)果，如果有Taqman qPCR的數(shù)據(jù)，會(huì)給你的文章加分不少。