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一、實驗介紹

早期的shRNA載體多採用RNA聚合酶III型啟動子介導shRNA的表達，RNA聚合酶III型啟動子如鼠源的U6啟動子和人源的H1啟動子可以在哺乳動物細胞中表達小分子RNA，隨著miRNA干擾機制的深入研究，發(fā)展出第二代siRNA載體，即採用RNA聚合酶II型啟動子CMW表達含測翼序列的miRNA模擬物，該載體模擬miRNA的加工，表達出來的shRNA進入RISC沉默複合物的效率要比RNA聚合酶III型啟動子表達的shRNA高十倍，抑制效率更好，且可以和EGP協(xié)調表達，方便觀察轉染效率

二、實驗週期

30-35工作日

三、交付標準

 >10ug shRNA載體，已確認shRNA目標基因轉染成功的細胞株，實驗報告，根據實驗要求，選擇蛋白質檢測或分子生物學檢測

四、客戶提供

目的基因NCBI登陸號

 五、實驗流程

設計干擾靶點                                  

構建干擾載體         培養(yǎng)293T細胞       靶基因表達豐度檢測    

豐度高-內源篩選     干擾質粒轉染293T細胞       QPCR檢測干擾效果

豐度低-外源篩選     靶基因真核表達載體構建     干擾質粒與表達載體轉染293T細胞     QPCR檢測干擾效果